當我們在養(yǎng)細胞的時候，有可能會出現(xiàn)如下的狀況：細胞生長緩慢、細胞變形、碎片增加、懸浮細胞容易成團、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點。本文締一生物/締一生物為您分析目前普遍使用的支原體檢測方法有幾種？

1、支原體的分離培養(yǎng)

  它是支原體污染鑒定的金標準，準確，價格便宜。但支原體在分離培養(yǎng)的過程中，要長出明顯克隆至少需要4周時間，所需時間較長。

2、ELISA方法

  檢測步驟復(fù)雜，出現(xiàn)誤差的幾率較高，對實驗者操作技巧有要求。同時試劑盒成本較高，普遍不被選用。

3、DNA熒光染色法

  它采用熒光染色劑Hoechst 33258和支原體DNA富含A-T的區(qū)域結(jié)合。價格適中。由于DNA檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養(yǎng)，因此一般需要幾天后才出結(jié)果。有假陽性和假陰性，需要與其他方法結(jié)合使用。

4、PCR技術(shù)

它根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計引物，對待檢樣本DNA進行擴增，通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。操作簡單、速度快，只需2-3小時即可出結(jié)果，通量高，價格適中。但是，不同廠家生產(chǎn)的PCR檢測試劑盒由于引物及內(nèi)在設(shè)計的不同，其準確度和敏感度有天壤之別。

目前，被各大實驗室及生物藥廠普遍選用的是德國Minerva Biolabs公司開發(fā)生產(chǎn)的支原體PCR檢測試劑盒。試劑盒在267bp的條帶，涵蓋了歐洲《藥典》中zui易感染細胞的26種支原體亞型，保證了其*的敏感度；通過內(nèi)控條帶的設(shè)計，防止了假陰性的發(fā)生。我國農(nóng)業(yè)部在2008年豬藍耳病疫苗研制的重點項目中，實驗者用此檢測法與培養(yǎng)法做了超過100次的平行比對實驗，結(jié)果全部一致，假陽性率和假陰性率為零。

因此，用PCR方法檢測支原體，其準確性與選擇的試劑盒的質(zhì)量有直接相關(guān)性。

綜上所述，您是不是已經(jīng)對目前普遍使用的支原體檢測方法有幾種，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢締一生物/締一生物資深專家。