新生牛血清中微生物的電鏡檢查

更新時間：2019-05-17 | 點擊率：1694

新生牛血清是細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)用于生產(chǎn)疫苗、生物藥及病毒載體的重要原材料，也是細(xì)胞學(xué)實驗常用的天然培養(yǎng)基。它的質(zhì)量好壞對細(xì)胞形態(tài)及生長情況的影響很大，尤其是要保證其無微生物的污染，因為微生物對細(xì)胞的污染會造成實驗結(jié)果的偏差，對生物制品的安全性也構(gòu)成威脅。國內(nèi)外的相關(guān)部門都提出了一系列的質(zhì)量檢測指標(biāo)。但也有人指出其不足，如對外源微生物的檢測項目較少、不能涵蓋所有微生物的檢測；檢測度也受到方法本身的限制而不能達(dá)到很高的水平。為此, 建立快速、、廣譜的新生牛血清外源因子檢測方法是非常必要的。

有生物制品機構(gòu)開發(fā)出電鏡監(jiān)測微生物的方法。其主要采取的是膜表面富積法來制備電鏡樣品。將有膜電鏡載網(wǎng)放入裝有新生牛血清的離心管中, 5000 rPmin 離心, 然后取出載網(wǎng)負(fù)染。同時設(shè)立實驗組和對照組。對于細(xì)菌，設(shè)置電鏡放大1萬倍，觀察時間為 30分鐘, 當(dāng)5 分鐘內(nèi)檢出細(xì)菌記為/ + + + , 10分鐘檢出細(xì)菌記為/ + + , 30 分鐘內(nèi)檢出記為/ +。對于病毒，設(shè)置電鏡放大3萬倍，借助目鏡觀測, 5分鐘內(nèi)檢出 n種記為/ n+ + +，10分鐘內(nèi)檢出記為/ n+ +，30分鐘內(nèi)檢出記為/ n+。研究人員選擇了三種國內(nèi)外不同新生牛血清的牌子，每個牌子的血清又選擇了3-10個批次。結(jié)果顯示，用培養(yǎng)基進(jìn)行無菌檢測時，大部分做的比較好，只有一個牌子的一個批次出現(xiàn)細(xì)菌檢測陽性，其余皆陰性。但用電鏡檢查時，對照組皆為陰性，但實驗組的大部分都是陽性（陽性率高達(dá)95.6%）。病毒的陽性率為34.8%。具體病毒的部分檢測圖像如下：

在方法上，作者認(rèn)為，與膜表面富積法制備的新生牛血清電鏡樣品相比, 常規(guī)負(fù)染法只能獲得極少的觀測視野, 且附著粒子極少。而膜表面富積法所制樣品可以在每個網(wǎng)孔取得觀測視野，粒子附著率應(yīng)提高104~105倍。該方法只要求血清中的微生物數(shù)量, 不要求微生物的顆粒密度，這樣即使在微生物密度極低的情況下, 也能有效利用電鏡進(jìn)行有效檢測。

作者認(rèn)為，對于污染程度極低的血清, 要經(jīng)過多個數(shù)量級的放大后才能在細(xì)胞

培養(yǎng)中體現(xiàn)出來。而采用針對性強的病毒檢測方法不能保證血清*避免病毒污染。因此，新生牛血清生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)不斷改進(jìn)生產(chǎn)和檢測工藝, 提高產(chǎn)品的質(zhì)量, 滿足使用單位不斷提高的質(zhì)量要求。

Ausbian精制新生牛血清系新西蘭血源，澳洲生產(chǎn)，出廠前經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)控，符合各項標(biāo)準(zhǔn)。血清經(jīng)過0.22微米過濾和15kGy的gamma射線照射滅能，可殺滅細(xì)菌、支原體，無微生物風(fēng)險，可滿足廣大用戶對新生牛血清的品質(zhì)需求。