不同PCR技術(shù)該怎么選？這些關(guān)鍵點要注意！

更新時間：2023-06-16 | 點擊率：1060

聚合酶鏈反應（PCR）是一種重要的分子生物學技術(shù)，廣泛應用于基因分析、疾病診斷和生物學研究、生物學檢測等過程中。

隨著科學的發(fā)展，PCR的變種技術(shù)也不斷涌現(xiàn)。

本文將介紹PCR、實時熒光PCR（qPCR）和數(shù)字PCR（dPCR）這三種方法的區(qū)別。

各類PCR簡介

普通PCR：

普通的PCR是一種在體外擴增特定DNA序列的技術(shù)。它包括三個步驟：變性、退火和延伸。通過使用引物、DNA模板和DNA聚合酶，可以在熱循環(huán)過程中多次復制目標DNA，從而快速擴增特定片段。

qPCR：

qPCR是PCR的實時熒光變種。它通過在PCR過程中引入熒光探針，實時監(jiān)測擴增反應的進程。這種熒光探針與目標DNA序列的特定區(qū)域結(jié)合，當DNA擴增過程中的熒光信號增加時，可以定量測量目標DNA的存在量。

dPCR：

dPCR通過將PCR反應分割成許多微小反應，使每個反應中只包含少量的DNA分子。通過計數(shù)陽性和陰性反應的數(shù)目，可以對目標DNA的存在進行定量。dPCR通常使用熒光探針等來標記反應產(chǎn)物。

基本原理是將稀釋后的核酸溶液，分散至芯片的微反應器或者微滴當中，每個反應器僅含有微量的核酸模板數(shù)。經(jīng)過PCR擴增之后，有一個核酸分子的模板的反應器就會發(fā)出熒光信號，沒有模板的反應器沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。

不同PCR技術(shù)的區(qū)別

檢測方法：PCR和qPCR都是間接檢測方法，依賴于熒光探針或染料的結(jié)合和信號產(chǎn)生。而dPCR是直接計數(shù)陽性和陰性反應的數(shù)目，不需要參考標準曲線或標準樣品。

定量精度：qPCR具有較高的定量精度，可以準確測量目標DNA的存在量。dPCR則具有更高的精確性和靈敏度，可以實現(xiàn)絕對定量，但對樣本量的需求較高。

靈敏度：dPCR通常比qPCR更敏感，能夠檢測低豐度的目標DNA。

成本和復雜度：PCR和qPCR的成本相對較低，儀器設(shè)備和試劑較為普及。而dPCR需要更高的投入成本，并且設(shè)備和操作相對復雜。

樣本處理：qPCR通常需要對樣本進行前處理，如提取和純化DNA，以獲得較好的擴增效果。而dPCR對樣本的處理要求較低，可以直接使用復雜的樣本。